胡凱將EDTA遞給江凡的時候，江凡忽然問道，「除了抑制核酸酶活性，你還知道它有什麼作用嗎？」
胡凱愣了愣，認真想了想，「能避免微量痕量DNA的降解？」
江凡點了點頭，露出一副孺子可教的模樣，這可把胡凱整不會了。
但就目前來看，這個年輕人好像還真的有什麼方法，可以配比出那個什麼非破壞性溫和浸泡液體。
真是這樣的話，嘶.......
這不禁越發讓他期待起來。
「0.05%體積占比的低濃度Tween-20。」江凡快速說道。
接過胡凱調配好的溶液後，江凡看著他，笑了一下，解釋道。
「這相當於是一種溫和非離子去垢劑，可以高效裂解細胞釋放核酸，不會破壞布料纖維素結構、造成織物褪色或縫線損傷。」
胡凱睜大雙眼，感覺知識進入自己的大腦，還沒接受完呢，又聽見江凡說。
「0.1mg/mL的低活性蛋白酶K，快點！」
「哦哦哦。」回過神來的胡凱屁顛屁顛地去工具台那裡配製。
江凡接過後，在胡凱的注視下，小心翼翼地用0.22μm濾膜，將特製的液體過濾除菌。
完事後，江凡還回頭看了胡凱一眼，「這樣做的目的是，既保證了痕量細胞的裂解與DNA釋放效率，又從根本上避免了對檢材造成任何不可逆的損傷。」
此時的胡凱早就沒有了當時的自信，而像是在課堂上的學生，手裡拿著紙筆，不斷記錄著。
接下來到了最關鍵的一步，能不能在布娃娃身上提取出第三個人的生物檢材，就靠這一步了！
江凡用移液槍吸取剛配製好的溫和裂解緩衝液，精準地滴在娃娃左耳咬痕處、領口、手臂接縫等目標區域。
並且嚴格控制緩衝液的用量，讓液體剛好浸潤布料表層的纖維，卻不會滲透進內部的棉絮填充物。
這樣的話，不會造成布料褪色、縫線鬆脫。
隨後她將布娃娃平穩放入恆溫孵育箱，在嚴格控制的溫度和濕度下進行溫和洗脫。
忙完這步後，江凡才轉過頭對胡凱說道。
「這種緩衝液不會破壞布料的纖維結構，只會通過溫和的去垢作用，讓附著在織物纖維縫隙里的細胞自然脫落。
同時釋放出細胞內的DNA分子，全程不會對物證本身造成任何可觀測的損傷。」
胡凱頭點得跟小雞啄米一般，同時手裡在記著，嘴裡還問道：「嗯嗯，要孵化多久才合適點呢？」
江凡想了想，「兩個小時吧。」
......
兩個小時後，胡凱看著自己寫了整整兩個小時的東西，然後輕輕地搖了搖趴在桌上睡著了的江凡。
「江顧問...江顧問...時間到了。」
被吵醒的江凡眨巴了一下迷糊的眼睛，雙眼猩紅，這幾天幾夜，他幾乎沒怎麼睡過覺。
所以才在等待的兩個小時裡打了個盹。
江凡把布娃娃從孵育箱中取出，用無菌濾紙輕輕吸走表面殘留的緩衝液，放在無菌操作台上自然晾乾。
原本洗得發白的布娃娃沒有任何破損、褪色、變形，連原本磨毛的衣角都和剛拿回來的時候一模一樣。
只需要晾乾後就能原樣送回謝曉楠，江凡可沒忘記，自己對她的承諾。
而他手中這份只有幾毫升的洗脫液里，已經很有可能藏著這樁27年懸案的密碼！
他看向一臉認真的胡凱，「下來就是進行提純了。」
隨後江凡用超順磁性磁珠法，對洗脫液進行純化，精準剔除掉溶液里的布料纖維、染料、蛋白雜質以及會干擾後續實驗的PCR抑制劑。
最終得到了幾十微升高純度、但總量極其微量的基因組DNA。
但現在擺在江凡面前的，還有一個難題——
對這些微量DNA的質量把控。
二十年的時光早已讓大部分DNA片段降解成了碎片。
常規的螢光定量PCR只能給出相對模糊的定量結果，根本無法準確判斷樣本里到底有多少能用於測序的完整DNA片段。
一旦貿然測序，極有可能因為模板質量不足，得到一堆無用的亂碼數據。
最後江凡選擇了微滴式數字PCR（ddPCR）進行樣本質控，這倒不是什麼超前科技，而是目前微量降解DNA定量與質量評估的金標準。
不同於常規PCR只能在反應結束後給出相對定量結果，ddPCR會先將反應體系通過微流控技術，拆分成兩萬多個完全獨立的皮升級水包油微滴。
每個微滴都是一個互不干擾的微型PCR反應器。
哪怕樣本里只有幾個完整的目標DNA分子，都會被分散在不同的微滴里，被精準擴增、計數，最終實現絕對定量。
同時還能準確檢測DNA的完整度和抑制劑殘留情況，徹底避免了常規PCR受擴增效率影響的定量偏差。
四十分鐘後，ddPCR的檢測結果出現在屏幕上。
江凡和胡凱死死盯著那清晰的陽性微滴分群圖、精準的絕對定量數值，懸了一夜的心終於穩穩落了地。
因為樣本中可用於測序的完整人類DNA片段總量、片段完整度均完全滿足實驗要求，沒有檢測到PCR抑制劑殘留。
這一步，成了！
「接下來的核心步驟，是雜交捕獲富集高通量測序（NGS）。」
江凡剛說完，忽然就聽見胡凱說，「江顧問，下來的我來吧，你說我做就行了。」
江凡愣了愣，隨即釋然笑了，「好！」
這些技術是前幾年研發出來，面前這位全省檢驗的扛把子，肯定是手拿把掐。
這個布娃娃上的DNA，不僅總量極低，還混雜了大量的干擾序列：
大部分是當年接觸過布娃娃的辦案人員的污染DNA、環境裡的微生物基因組。
真正屬於周立偉的目標DNA，占比不到千分之一。
如果直接做常規全基因組測序，就像對著一片長滿雜草的荒原盲掃，99%以上的測序數據都是無用的干擾信息。
嫌疑人的基因信號會被徹底淹沒在背景噪音里，根本無法識別。
而雜交捕獲富集技術，就是為了解決這個難題而生的。
胡凱使用的法醫專用捕獲試劑盒裡，帶有數十萬條和人類基因組中用於個體識別的核心SNP位點、STR位點完全互補的核酸探針......
（求求各位哥姐們了，求求你們在書籍首頁點評打分了，五十多萬字，評分都還沒出，完全是為愛發電，我實在不想切書啊~~~
有個QQ的書友群，是上本書的，210322419，答案是江樂，有興趣的讀者老爺可以加群，還可以看到上一本書的內容哦~）