有了這個突破之後,後面的工作順暢了很多。
他用同樣的方法繼續進行溶瘤病毒的定向培養,每一批次的元力催生都讓病毒的性能往上提升一截。
經過將近兩個月的反覆優化,他得到了一株性能極其優異的溶瘤病毒株,感染效率高、特異性強、裂解能力出眾,在體外實驗中能把靶向的癌細胞在四十八小時內全部裂解乾淨。
接下來是基因編輯工具的搭載。
CRISPR-Cas9是目前最成熟的基因編輯系統之一。
李斌設計了一套靶向TERT基因的sgRNA,配合高保真的Cas9蛋白,組裝成完整的基因編輯載體。
他把這套編輯系統通過慢病毒載體搭載到之前優化的溶瘤病毒上,形成了一個複合結構,外殼是溶瘤病毒,內部攜帶了基因編輯工具。
搭載過程比預想的順利。
可能跟元力催生過溶瘤病毒的某種"適應性"有關。
那些經過元力浸潤的病毒對外源基因片段的裝載效率非常高,幾乎不需要額外的篩選就能獲得高表達量。
李斌用了一周多的時間完成了載體構建和驗證,通過測序確認編輯系統正確整合到了病毒基因組中。
五月中旬,完整的複合型溶瘤病毒誕生了。
李斌給它編號LV-GE-01,溶瘤病毒-基因編輯-第一代。
但他心裡清楚,真正讓LV-GE-01與眾不同的那個因素,永遠不會出現在任何論文裡。
接下來是驗證實驗。
他用了六種不同來源的癌細胞系做體外測試,肺癌、肝癌、乳腺癌、結直腸癌、胰腺癌、黑色素瘤。
每種癌細胞系都設置了對照組和實驗組,對照組不加病毒,實驗組以不同的感染複數加入LV-GE-01。
然後他跟蹤了細胞的增殖曲線、端粒長度變化、TERT基因的表達水平、細胞凋亡率等多個指標。
結果幾乎是教科書級別的完美。
實驗組的癌細胞在感染LV-GE-01之後,先是出現明顯的增殖停滯,然後開始大量凋亡。
端粒長度檢測顯示,那些存活下來的少數細胞也出現了端粒的顯著縮短,而且隨著分裂代數的增加端粒繼續縮短,最後全部進入衰老狀態。
TERT基因的表達水平檢測證實了基因編輯的成功,編輯效率超過百分之九十九,殘餘的TERT表達也被大幅抑制。
六種癌細胞系,無一例外。
李斌又做了更進一步的驗證。
他把經過LV-GE-01處理後的癌細胞繼續傳代培養,觀察它們是否會出現耐藥性或者"逃逸"。
結果連續傳了二十代,那些存活下來的癌細胞始終保持著端粒縮短的狀態,沒有出現新的端粒酶激活機制。
這意味著一件事,TERT基因的敲除是永久性的,癌細胞失去了重新激活端粒酶的能力。
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復發的基礎被徹底剷除了。
六月初,李斌完成了最後一組驗證實驗,把所有的實驗數據和圖譜整理歸檔。
他坐在實驗室的電腦前面,把幾百個數據文件按照時間順序排列好,把關鍵結果的圖表重新繪製了一遍,把實驗記錄本上的手寫筆記掃描成電子版。
一份完整的、可供他人審閱的實驗資料逐漸成型了。
但這裡面的核心環節缺失了。
他翻到溶瘤病毒定向培養的部分,筆記本上寫的是一套常規的培養方案,溫度、時間、培養基成分、傳代頻率,所有參數都清清楚楚。
任何一個受過訓練的研究人員按照這個方案去做,都能得到一株溶瘤病毒。
但那株病毒的性能跟LV-GE-01差了十萬八千里。
中間缺少的那一步,寫在空氣里。
李斌想到了一件事,他要給LV-GE-01加上了基因鎖。
基因鎖的原理並不複雜。
他在溶瘤病毒的基因組中嵌入了一段自我抑制序列,這段序列在正常情況下處於沉默狀態,不影響病毒的功能表達。
但一旦有人試圖對病毒進行擴增培養或者基因操作,特定的觸發條件會讓這段序列激活,啟動病毒的自我降解程序。
換句話說,別人就算拿到了LV-GE-01的樣本,也沒辦法通過常規方法培養出更多的病毒。
病毒的繁殖能力被鎖住了,除了李斌本人,沒人能解開這把鎖。
解鎖的方式跟元力有關。
只有經過李斌元力浸潤過的特殊培養基才能維持LV-GE-01的擴增能力,沒有那一縷元力的參與,病毒在傳代過程中就會逐漸喪失活性,兩到三代之後徹底失活。
他不是想把這種技術鎖在象牙塔里,他最終的目的正是讓它造福所有人。
但在那之前,他需要確保這份成果不會被某些人竊取、壟斷、變成收割病人的工具。
他的規劃很清楚:在合適的時候回到家鄉建公司,把LV-GE-01的技術產業化,讓家鄉藉此騰飛。
在那之前,它需要一個保護罩。
加了基因鎖後,李斌坐在椅子上,長長地吐出一口氣。
他低頭看了看自己的雙手,元力在掌心裡緩緩流動。
溶瘤病毒的定向培養只是一個開始,往後他還會用它做更多的事情,改變更多的局面。
他把電腦關了,李斌站起來,把白大褂脫下來掛在門後的掛鉤上,拿起桌上的鑰匙和手機,關了燈,推門走出去。
走廊里漆黑一片,走到一樓大廳的時候,門衛跟他打了個招呼:"李同學,又是你啊,天天弄到這麼晚。"
"快了,實驗快做完了。"李斌笑著回了一句,推門走出了學院樓。
李斌沿著那條種滿梧桐的路往宿舍區走,腦子裡一刻也沒有停下來。
他已經把LV-GE-01封存在了-80度冰箱的一個專屬隔層里,加了生物安全鎖和密碼,除了他之外沒有人能取到。
那支小小的凍存管,裝著的東西足以改變千萬人的命運。